• Cấy một thuộc địa duy nhất xem tỷ số bóng đá hôm nay 5 ml LB cộng với kháng sinh phù hợp và phát triển 16 đến 20 giờ ở 37oC.
• pipet 170 ml nuôi cấy qua đêm xem tỷ số bóng đá hôm nayo ống 500 μl chứa 30 μl glycerol. Trộn nó và lưu trữ tại
• ly tâm phần còn lại của văn hóa ở mức 1.500g xem tỷ số bóng đá hôm nay máy ly tâm máy tính để bàn xem tỷ số bóng đá hôm nay 10 phút, đổ ra phần nổi phía trên, tiếp tục viên đạn xem tỷ số bóng đá hôm nay nền văn hóa còn lại (còn lại) với một volex. Thêm 0,2 ml dung dịch I [chứa 50 mM glucose, 10 mM EDTA và 25 mM Tris (pH 8.0)] và ủ trên băng xem tỷ số bóng đá hôm nay 5 phút.
• Thêm 0,4 ml dung dịch mới được chuẩn bị II (0,2 N NaOH và 1% SDS), trộn nhẹ nhàng và ủ trên băng xem tỷ số bóng đá hôm nay 5 phút.
• Thêm 0,3 ml dung dịch III (3 m KAC, pH 5,3 - 5.5), trộn nhẹ và đóng băng ở mức - 80 C xem tỷ số bóng đá hôm nay 15 phút đến qua đêm.
• Thaw ở nhiệt độ phòng và máy ly tâm ở mức 2.800g xem tỷ số bóng đá hôm nay máy ly tâm máy tính để bàn xem tỷ số bóng đá hôm nay 15 phút xem tỷ số bóng đá hôm nay một vi ống để thu thập kết tủa.
• Chuyển 0,8 xem tỷ số bóng đá hôm nay phần nổi phía trên sang một microtube mới. Thêm 2 xem tỷ số bóng đá hôm nay RNase và ủ 1 đến 3 giờ.
• Thêm 0,5 ml phenol/chloroform, xoáy và ly tâm xem tỷ số bóng đá hôm nay 5 phút.
• 3768_3925
• Tháo phần nổi phía trên, rửa viên với 70% EtOH và ly tâm ở mức 12.000g xem tỷ số bóng đá hôm nay 2 phút.
• ly tâm ngắn gọn và loại bỏ dung dịch ethanol còn lại bằng cách sử dụng đường ống.
• Hòa tan viên xem tỷ số bóng đá hôm nay 50 ml H2O.
• pipet 5 ul của dung dịch DNA xem tỷ số bóng đá hôm nayo một ống chứa 5 ml H2O và 1 ml 10 x Tae. Lưu trữ phần còn lại của giải pháp DNA trong mật70OC.
• Phân tích DNA xem tỷ số bóng đá hôm nay bộ đệm tải trên gel agarose 1%.

• Chuẩn bị các mẫu: Thêm 80 ml nước xem tỷ số bóng đá hôm nayo mỗi ống mẫu.

• Chuẩn bị thuốc thử làm việc BCA: Đối với 10 mẫu thử nghiệm bao gồm các tiêu chuẩn, pipet 10 ml thuốc thử A thành ống 50 ml. Pipet 200 & mu; l của thuốc thử B xem tỷ số bóng đá hôm nayo cùng một ống có chứa a và trộn chúng.

• Tiến hành xét nghiệm: Thêm 1 ml thuốc thử làm việc BCA xem tỷ số bóng đá hôm nayo mỗi tiêu chuẩn BSA, trống và mẫu mẫu. Ủ tất cả các ống trong bồn nước 60oC trong 15 phút và trong bồn nước RT trong 5 phút.

• Nghiền mô thực vật xem tỷ số bóng đá hôm nay nitơ lỏng thành bột mịn.
• Thêm 2 thể tích bộ đệm chiết và mài mẫu mô nhiều hơn (tùy chọn: sonicate mẫu xem tỷ số bóng đá hôm nay 15 giây với vi mô).
• spin ở 13.000 vòng / phút xem tỷ số bóng đá hôm nay 30 phút xem tỷ số bóng đá hôm nay một vi hạt tại 4OC
• Chuyển phần nổi bề ngoài xem tỷ số bóng đá hôm nayo một ống sạch mới
  Pipette 10 UL để xác định nồng độ protein
  Lưu trữ phần còn lại xem tỷ số bóng đá hôm nay -80 oc.

• Rửa đĩa thủy tinh, miếng đệm và lược
• Lau các mục trên bằng ethanol 95% và thiết lập chúng xem tỷ số bóng đá hôm nay hộp tạo gel.
• Chuẩn bị 10% SDS/trang tách xem tỷ số bóng đá hôm nay giải pháp xem tỷ số bóng đá hôm nay:
  niêm phong phía dưới và các cạnh của bộ xem tỷ số bóng đá hôm nay
  Đổ dung dịch gel xem tỷ số bóng đá hôm nayo bộ gel cho đến khi nó đạt khoảng 1 inch bên dưới
  cạnh của tấm dưới
  Lớp phủ với butanol (nước sata) và để nó trùng hợp xem tỷ số bóng đá hôm nay ít nhất 40 phút

• Tạo xem tỷ số bóng đá hôm nay xếp chồng với hỗn hợp sau:
• 8 ml nước, dung dịch đệm xem tỷ số bóng đá hôm nay trên 4 ml, 2,4 ml acrylamide (30%), 2,4 bis,
  200 UL 10% AP và 10 UL Temed

hút butanol với giấy lọc từ xem tỷ số bóng đá hôm nay tách
Đổ hỗn hợp gel xếp chồng xem tỷ số bóng đá hôm nayo các bộ gel
Đặt một chiếc lược xem tỷ số bóng đá hôm nayo mỗi bộ gel và để cho trùng hợp trong 20 phút.

Trộn chiết xuất protein (20 UG tổng số protein) với bộ đệm tải 4 ul 10x và
Nước (Tổng số 40 UL)
Đun sôi hỗn hợp mẫu xem tỷ số bóng đá hôm nay 10 phút
Microfuge và tải hỗn hợp mẫu lên xem tỷ số bóng đá hôm nay

Chạy gel ở 60 Ma xem tỷ số bóng đá hôm nay 2 - 3 giờ.

bộ đệm:
1. Bộ đệm mẫu (10 xem tỷ số bóng đá hôm nay): 1 xem tỷ số bóng đá hôm nay glycerol, 0,5 xem tỷ số bóng đá hôm nay 2-mercaptoethanol, 0,23 g SDS, 0,08 g Tris,PH 6.8.
2. Bộ đệm chạy (1 L): 30,3 g bazơ Tris, 144.0 g glycine, 10,0 g SDS,PH 8.3.
3. 10 x PBS (muối đệm phốt phát) (1 L): 80 g NaCl, 2 g KCl, 14,4 g Na2HPO4, 2,4 g Kh2po4,PH 7.4.

xem tỷ số bóng đá hôm nay kinase xét nghiệm:

1. Cấy vi khuẩn và ủ qua đêm. .
2. Chuyển nuôi cấy vi khuẩn từ tấm xem tỷ số bóng đá hôm nayo các ống riêng lẻ (nhà sản xuất chắc chắn các số trên tấm khớp với chính xác các số trên các ống.)
3. ly tâm và loại bỏ phần nổi phía trên.
4. Thêm 30 Phal Te xem tỷ số bóng đá hôm nayo mỗi ống và xoáy để hòa tan các kết tủa vi khuẩn.
5. Thêm 30 PhaL phenol/chloroform và xoáy. (Mặc áo thủy tinh và phòng thí nghiệm.)
6. ly tâm.
7. Chuyển 25 PhaL của dung dịch Uplayer xem tỷ số bóng đá hôm nayo các ống nhỏ có chứa bộ đệm mẫu. (Một lần nữa, hãy đảm bảo các số trên ống lớn khớp với chính xác các số trên các ống nhỏ.)
8. Làm cho một agarose 1%.
9. Tải các mẫu xem tỷ số bóng đá hôm nayo các giếng trong gel và chạy gel với 120 V trong 3 giờ.
10. Chụp ảnh bằng hệ thống Biodoc.
11. So sánh kích thước của các bản sao riêng lẻ và ghi lại kết quả trên sổ nhật ký. Tấn công hình ảnh xem tỷ số bóng đá hôm nayo sổ nhật ký để tham khảo sau

1. Sau khi hoàn thành điện di, chụp ảnh xem tỷ số bóng đá hôm nay.
2. Loại bỏ bất kỳ phần không cần thiết của xem tỷ số bóng đá hôm nay. Đánh dấu các vị trí đánh dấu bằng cách sử dụng kim bằng mực Ấn Độ.
3. 13877_13970
4. Trong khi đó, hãy chuẩn bị một chồng cắt giấy Whatman 3 mm (lớn hơn kích thước gel), đặt bộ giấy này cắt xem tỷ số bóng đá hôm nayo một món nướng lớn, ngâm giấy cắt bằng dung dịch NaOH 1,5 M NaCl/0,5 M.
5. Đảo ngược xem tỷ số bóng đá hôm nay sao cho mặt dưới ban đầu của nó không cao. Đặt xem tỷ số bóng đá hôm nay lên các vết cắt giấy 3 mm ẩm (đảm bảo không có bọt khí) giữa các vết cắt giấy và xem tỷ số bóng đá hôm nay).
6. Cắt một miếng màng Genescreen (cùng kích thước với gel), đánh dấu phía phủ bằng bút chì và làm ướt màng xem tỷ số bóng đá hôm nay nước xem tỷ số bóng đá hôm nay 5 phút.
7. Đặt màng lên xem tỷ số bóng đá hôm nay (với mặt phủ đối diện với xem tỷ số bóng đá hôm nay, không có bọt khí giữa xem tỷ số bóng đá hôm nay và màng).
8. ướt hai mảnh giấy Whatman (cùng kích thước với xem tỷ số bóng đá hôm nay) và đặt chúng lên màng riêng.
9. (Tùy chọn: Sử dụng Sara-rapper để che món nướng và loại bỏ Sara-rapper xem tỷ số bóng đá hôm nay vùng gel bằng dao cạo)
10. Đặt một chồng các kho giấy (cùng kích thước với xem tỷ số bóng đá hôm nay) lên trên các giấy tờ Whatman.
11. Đặt một tấm kính lên trên cùng của ngăn xếp cùng với trọng lượng 500 g.
12. Hãy chuyển qua đêm (chắc chắn có đủ giải pháp, nhưng không vượt quá mức của xem tỷ số bóng đá hôm nay).
13. Tháo khăn và giấy tờ Whatman. Bật xem tỷ số bóng đá hôm nay mất nước và cùng với màng và đặt chúng lên một tờ giấy khô.
14. Bột ra và loại bỏ gel. Ngâm màng xem tỷ số bóng đá hôm nay bộ đệm 6 x SSC/200 mM, bộ đệm PH7.5 xem tỷ số bóng đá hôm nay 5 phút.
15. Bộ lọc hiện đã sẵn sàng để lai.