tỷ số trực tuyến bóng đá nghiên cứu lipidomics

trực tiếp tỷ số bóng đá chiết xuất lipid cho các lá Arabidopsis (và khác) (trực tiếp tỷ số bóng đá 1)

Quy trình này được khái quát hóa. Sử dụng các mẫu nhỏ hơn là có thể.mrroth@ksu.edu(Vui lòng bao gồm một dòng chủ đề) để hỏi.

A .pdf của trực tiếp tỷ số bóng đá thức này, bao gồm các hướng dẫn vận chuyển, có thể được tìm thấyở đây.

  1. Lấy 1 đến 8 lá (hoặc tối đa 3 cây nhỏ- Xem ghi chú #2); Nhúng nhanh trong 3 ml 75 CC (đã làm nóng trước) isopropanol với 0,01% BHT (butylated hydroxytoluene, ví dụ, Sigma B1378) và tiếp tục nóng trực tiếp tỷ số bóng đá15 phút. Sử dụng ống thủy tinh 50 ml (25 x 150 mm) với nắp vít lót Teflon.

  2. Thêm 1,5 ml chloroform và 0,6 ml nước, xoáy; Sau đó kích động (máy ấp trứng lắc) ở nhiệt độ phòng trực tiếp tỷ số bóng đá1 giờ. Chuyển (Long, Glass Pasteur Pipetes) chiết xuất trực tiếp tỷ số bóng đá sang ống thủy tinh với nắp ốc vít lót Teflon.

  3. Thêm 4 ml chloroform/metanol (2: 1) với 0,01% BHT; Lắc 30 phút.

  4. rửa ngược tùy chọn: Thêm 1 ml 1 m KCl vào chiết xuất kết hợp, xoáy hoặc lắc, ly tâm, loại bỏ pha trên. Thêm 2 ml nước, xoáy hoặc lắc, ly tâm, loại bỏ pha trên.

  5. Đổ đầy các ống chứa chiết xuất trực tiếp tỷ số bóng đá với nitơ, lưu trữ ở -20 ° C (tủ đông). Khi bạn đã sẵn sàng để chuẩn bị vận chuyển, sẽ bay hơi dung môi hoàn toàn dưới khí nitơ hoặc trong speedvac và được làm lại trong khoảng 1,0 ml chloroform.2.0 ml lọ thủy tinh rõ ràng với nắp vít lót teflon33642_33855luôn luôn33876_33921mrroth@ksu.edu

  6. Lá chiết khô ở lò 105 ° C qua đêm; Cân trực tiếp tỷ số bóng đá trọng lượng "khô" tốt nhất là sử dụng cân bằng nặng (tính bằng gam) đến 6 thập phân (tức là, microgam).

Trình diễn video về trực tiếp tỷ số bóng đá 1:

Bấm vào đây để xem tại YouTube (có sẵn màn hình đầy đủ)

trực tiếp tỷ số bóng đá khai thác lipid cho lá (trực tiếp tỷ số bóng đá 2, được thử nghiệm trên Arabidopsis và Sorghum)

Một trực tiếp tỷ số bóng đá chiết xuất lipid nhanh hơn đã được mô tả gần đây bởi Shiva et al. (2018):https: //plantmethods.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13007-018-0282-y

Cách tiếp cận này nhận được sự chiết tốt từ lá trong một bước duy nhất. Nếu theo trực tiếp tỷ số bóng đá 2, sau khi tách các vật liệu thực vật với chiết xuất lipid, hãy làm theo các bước số 5 và #6 trong giao thức trên.

Trình diễn video về trực tiếp tỷ số bóng đá 2:

Bấm vào đây để xem tại YouTube (có sẵn màn hình đầy đủ)

trực tiếp tỷ số bóng đá chiết xuất lipid cho lá (trực tiếp tỷ số bóng đá 3 - nếu bạn cần phân tích GiPC, ngoài các trực tiếp tỷ số bóng đá khác

35448_35599

dung môi H từ Markham et al. (2006,http: //www.jbc.org/content/281/32/22684.full.html):
isopropanol/hexane/water 55:20:25, giai đoạn trên bị loại bỏ
440 ml 2-propanol w/0,01% BHT (0,04g)
160 ml hexane (lớp HPLC)
200 ml nước

Trộn chúng lại với nhau (khuấy động mạnh mẽ) và loại bỏ pha trên để loại bỏ. Pha dưới phải rõ ràng và là dung môi H.

  1. Hoàn thành các bước 1-3 trong trực tiếp tỷ số bóng đá 1 hoặc trực tiếp tỷ số bóng đá 2 Phương thức một bước.

  2. đến mô lá còn lại, thêm 4 ml dung môi H Khăn. Đặt ống vào khối nóng ở 60 ° C trong 15 phút.

  3. Lặp lại ba lần nữa cho tổng số 4 lần khai thác dung môi. Tổng thể tích của tất cả các lipid được chiết xuất cộng với dung môi là khoảng 37 ml (nếu bạn đã sử dụng trực tiếp tỷ số bóng đá 1).

  4. Đổ đầy ống bằng nitơ, lưu trữ ở -20 ° C (tủ đông). Khi bạn đã sẵn sàng để chuẩn bị vận chuyển, bay hơi hoàn toàn dưới khí nitơ hoặc speedvac, ở mức dưới 40 CC và được tái tạo trong khoảng 1,0 ml chloroform.2.0 ml lọ thủy tinh rõ ràng với nắp vít lót teflon(ví dụ: Kính rõ ràng; 2 ml; nắp lót PTFE rắn; 1/2 dr., Danh mục khoa học của Fisher #03-391-7a, Thermo Khoa học số: B7800-1). Dung dịch bay hơi từ các mẫu trong lọ 2 ml trước khi vận chuyển.luôn luônHãy trực tiếp tỷ số bóng đá chúng tôi biết trước khi bạn gửi mẫu của mình:mrroth@ksu.edu

  5. Lá được chiết bằng dung môi HWill StickĐến kính khi khô, trừ khi một chút chloroform được thêm vào và lá được đẩy vào một quả bóng. Một thìa hoạt động tốt để tạo thành bóng.