xem bóng đá số thể

Hóa chất được đề xuất: Bộ dịch Nick, ENZO Chẩn đoán mèo. Số 42803.

Ghi nhãn biotin xem bóng đá số plasmid hoặc DNA bộ gen

Tháo xem bóng đá số slide từ tủ đông -70 ° C, loại bỏ xem bóng đá số nắp đậy bằng lưỡi dao cạo và làm khô xem bóng đá số slide trong loạt ethanol (70%, 95%, 100%ethanol; 5 phút mỗi lần ở nhiệt độ phòng). xem bóng đá số slide phải được sấy khô trong vài giờ trước ish.
Chuẩn bị hỗn hợp lai sau. 10 PhaL xem bóng đá số hỗn hợp lai được sử dụng cho một slide và được phủ bằng một phiếu vỏ '18 x 18 '.

formamide khử ion	10 PhaL
20 x SSC	2 Phag
DNA tinh trùng bị cắt (10 mg/ml)	2 PhaL
DNA đầu dò	0,5-2
Nước khử ion hoặc cất	x
50 % dextran sulfate	4 PhaL
Khối lượng phản ứng tổng số (Sử dụng H₂o để điều chỉnh tổng thể tích thành 20 PhaL)	20 PhaL

Đối với bộ gen, hãy chuẩn bị hỗn hợp lai như dưới đây. Lượng DNA chặn cắt là phần quan trọng nhất xem bóng đá số thủ tục này.

formamide khử ion	10 PhaL
20 x SSC	2 Tiếtg
DNA tinh trùng cá hồi bị cắt (10 mg/ml)	2 PhaL
DNA đầu dò	1 PhaL
Chặn DNA	1
50 % dextran sulfate	4 PhaL
Khối lượng phản ứng tổng số (Sử dụng H₂o để điều chỉnh tổng thể tích thành 20 PhaL)	20 PhaL

Từ chối hỗn hợp bằng cách đặt ở 75 ° C trong 5 phút, ngay lập tức làm lạnh trên băng trong 5 phút và quay xuống dung dịch.
Đặt xem bóng đá số slide (bằng cách sử dụng giá đỡ slide có thể xử lý 10 slide 2020) trong 70 % formamide trong 2 x ssc (140 ml formamide + 20 ml 20 x ssc + 40 ml H₂o, giải pháp này có thể được sử dụng nhiều lần; Chất lượng xem bóng đá số formamide là quan trọng, i.
Chuyển ngay xem bóng đá số slide vào chuỗi ethanol (70%, 95%và 100%, 5 phút mỗi slide ở 20 ° C) và không khí làm khô xem bóng đá số slide.
Thêm 10 PhaL của hỗn hợp lai vào mỗi slide và nắp bằng một cú trượt vỏ '18 x 18 'mm. Đặt xem bóng đá số slide trong buồng ẩm (bất kỳ loại hộp nào cũng có thể được sử dụng với 2 lớp giấy ướt 3 mm ở phía dưới; sử dụng xem bóng đá số thanh nhựa để giữ xem bóng đá số slide).
ủ xem bóng đá số slide trong buồng ẩm ở 37 ° C trong tối thiểu 6 giờ hoặc qua đêm.