bóng đá số

Tiêu hóa bóng đá số

1. Làm bóng đá số loại cocktail như sau:

Cocktail lai Nam

10 X bộ đệm	3.50
BSA [Stock: 10 mg/ml]	0.35
DDH20	5.65
RNase [Stock: 100 mg/ml]	0,50 ml
ECORI [12 đơn vị/PhaL]	10.00 PhaL
Total	20.00 Pha/ống

1. Thêm 15 μl [20 Ném25 μg] bóng đá số vào mỗi ống chứa 20 μl cocktail. Pipet nhiều lần để trộn.
2. ủ các mẫu qua đêm [tối thiểu 10 giờ] bóng đá số lò 37 ° C.

Phép lai miền Nam

1. Gel Stain bóng đá số 50 μl 10 mg/ml ethidium bromide trong 30 phút và chụp ảnh.
2. 32302_32449
3. Rinse gel hai lần bằng nước cất và xử lý bằng NaOH 1 L 0,4m trong 20 phút bóng đá số sự lắc nhẹ [màu của bộ đệm tải sẽ trở lại màu xanh lam].
4. Đổ đầy đĩa thủy tinh bóng đá số 2 L 0,4m NaOH và đặt một tấm thủy tinh lên trên cùng. Đặt một mảnh giấy sắc ký 3 mm '23 x 30 cm lên trên tấm để các đầu được ngâm trong chất lỏng [‘wick,].
5. WET Hai '22 .5 x 22,5 cm 'tờ giấy sắc ký bóng đá số NaOH 0,4m và đặt lên trên tờ Wick. Loại bỏ bong bóng không khí như trong bước 4.
6. Đặt gel lên bề mặt trên giấy xuống, sau đó đặt một tấm màng nylon lên gel. Cắt gel bóng đá số kích thước chính xác của màng.
7. Đặt một dải nhựa giữa hai nửa bóng đá số.
8. WET Hai '10 x 20 cm 'các mảnh giấy sắc ký và đặt trên màng. Loại bỏ bong bóng không khí như bóng đá số bước 4.
9. Bao phủ tất cả các khu vực, ngoại trừ gel, bóng đá số bọc nhựa để ngăn chặn sự bay hơi và đảm bảo rằng chuyển động mao dẫn chỉ thông qua gel.
10. Đặt một chồng khăn giấy lớn lên bóng đá số khu vực gel. Đặt một tấm thủy tinh lên cả hai chồng khăn giấy và đặt một trọng lượng lên bóng đá số đĩa.
11. Rinse Membrane bóng đá số 2x SSC trong 5 phút10 phút. Sử dụng ngay lập tức hoặc lưu trữ ướt.

màng chuyển nylon: màng hybond-xL nitrocellulose, danh mục # rpn203s; GE Health, Đại lộ 800 trăm năm, P.O.http: //www5.gelifescatics.com.