Trung tâm tài nguyên di truyền lúa mì

tỷ số bóng đá euro hôm nay (FPG)

Giao thức sau đây dành cho hành và lúa mạch đen, nhưng cũng nên áp dụng cho các loài thực vật khác. TRONGAllium CepavàSecale Cereale, Thời gian chu kỳ tế bào ở 25 ° C là khoảng 12 giờ. Do đó, việc xử lý các mẹo rễ trong 24 giờ trong môi trường có chứa BRDU dẫn đến đủ số lượng metaphase trong đó nhiễm sắc thể cho thấy sự kết hợp của BRDU trong ba trong số bốn chuỗi polynucleotid DNA và cho phép nhuộm vi sai của các chromatid sau khi nhuộm tỷ số bóng đá euro hôm nay.

    1. Hạt nảy mầm trên giấy lọc ẩm trong đĩa Petri ở 20 ° C.
    2. Chuyển 15 cây con sang đĩa Petri lớn ( 20 cm) khi các đầu rễ dài khoảng 1, 1,5 cm, chứa 125 ml môi trường xử lý mới chuẩn bị. Phương tiện điều trị bao gồm 10-4M Brdu, 5 x 10-8M FDU và 10-6M urd, hòa tan trong nước máy. Ủ các đầu rễ trong 7 giờ trong bóng tối ở 25 ° C (FDU được thêm vào vì nó ngăn chặn sự kết hợp của THD vào DNA bằng cách ức chế sự tổng hợp của thymidine; uridine được thêm vào để tránh các tác động tiêu cực của FDU đối tỷ số bóng đá euro hôm nay quá trình tổng hợp RNA).
    3. Chuyển các mẹo gốc sang môi trường tươi 125 ml của cùng một chế phẩm và ủ trong 17 giờ trong bóng tối ở 25 ° C; hoặc đến 125 ml môi trường mới chuẩn bị bao gồm 10-4M THD và 10-6M urd hòa tan trong nước máy; và ủ trong 17 giờ trong bóng tối ở 25 ° c.
    4. Thêm colchicine (nồng độ cuối cùng 0,05 %) trong 3 h cuối cùng.
    5. sửa trongCarnoy's Iít nhất là qua đêm ở 5 ° C.
    6. Chuyển mẹo rễ sang 45 % axit axetic trong 2 phút3 phút hoặc tiêu hóa tỷ số bóng đá euro hôm nay pectinase/cellulase hoặc cytase để làm mềm mô.
    7. Chuẩn bị bí trong 45 % axit axetic. Kiểm tra chất lượng của sự lan truyền dưới độ tương phản pha và acoRoDing tỷ số bóng đá euro hôm nay công nghệ FPG được mô tả dưới đây.
    8. Xóa các lớp phủ bằng băng khô.
    9. Truyền qua chuỗi 96 %, 70 %, 50 %và 30 %, sau đó nước cất và cuối cùng là không khí khô.
    10. Xử lý các slide trong 1 giờ tỷ số bóng đá euro hôm nay 0,01 % ribonuclease A (Sigma R-4875, từ tuyến tụy bò) hòa tan trong 0,5 x ssc.
    11. Rửa sạch trong 0,5 x ssc.
    12. Vết bẩn trong 30 phút tỷ số bóng đá euro hôm nay fluorochrom Hoechst 33258 (H 33255, Bisbenzimide, ICN Biomedicals Inc. #190304) (1 mg H 33258
    13. Rửa sạch trong 0,5 x ssc.
    14. 33561_33647
    15. ủ trong 0,5 x SSC ở 55 ° C trong bể nước trong 1 h.
    16. nhuộm trong 3 % Giemsa (Merck 3204) trong bộ đệm Soerensen Phosphate pH 6.8.
Bộ đệm của Soerensen
Stock Stain
Phần A Natri phosphate dibasic (NA2hop4) 9.47 g / l H2O 58 ml
Phần B Kali dihydrogen phosphate (KH2PO4) 9.07 g / l H2O
42 ml
  1. Rửa sạch trong 0,5 x ssc và khô không khí (có thể được thực hiện vĩnh viễn bằng cách ngâm trong xylene và gắn trong euparal hoặc permount).

Giải pháp

  • 10-4M Brdu (5-bromo-2'-deoxyuridine, Sigma B-5002): 30,7 mg/L nước cất.
  • 10-4M THD (2'-deoxythymidine, Sigma T-5018): 24,2 mg/L nước cất.
  • 10-6M urd (Uridine, Sigma U-3750): Giải pháp chứng khoán là 1,2 mg/100 ml nước cất; Thêm dung dịch chứng khoán 20 ml trên mỗi lít nước cất.
  • 5 x 10-8M FDU (5-fluoro-2'-deoxyuridine, Sigma F-0503): Giải pháp chứng khoán là 1,2 mg/100 ml nước cất; Thêm dung dịch chứng khoán 1 ml trên mỗi lít nước cất.
  • 35746_358403C6H5o7· 2H2O) cộng tỷ số bóng đá euro hôm nay 175,3 g natri clorua, NaCl/L nước cất. Giải pháp này có thể được lưu trữ trong vài tháng;