Phát hiện tín hiệu tỷ số bóng đá hôm nay tại chỗ (ish) với streptavidin

Hóa chất được đề xuất: Bộ dụng cụ DetekTHER HRP, ENZO Chẩn đoán Cat. Số 43820.

1. 30547_30661
2. Chuẩn bị hỗn hợp tỷ số bóng đá hôm nay sau. 10 PhaL của hỗn hợp tỷ số bóng đá hôm nay được sử dụng cho một slide và được phủ bằng một phiếu vỏ '18 x 18 '.

2 x SSC ở nhiệt độ phòng trong 5 phút,

2 x SSC ở 37 ° C trong 10 phút,

2 x SSC ở nhiệt độ phòng trong 5 phút và

1 x PBS ở nhiệt độ phòng cho 5 mi

1. Chuẩn bị linh hồn tỷ số bóng đá hôm nay (Streptavidin liên hợp peroxidase)₂31621_31715
2. Sau khi rửa PBS 1 x, để ráo nước (nhưng không bao giờ khô) các slide trên khăn giấy.
3. Áp dụng 100 dung dịch phát hiện trên mỗi slide và nắp bằng trượt '22 x 22 'mm; Sau đó đặt các slide trong cùng một buồng ẩm được sử dụng cho bước tỷ số bóng đá hôm nay và ủ ở 37 ° C trong 30 phút.
• 0,05% DAB (Diaminobenzidine tetrahydrochloride) là 5 mg DAB trong 10 ml 1 x pbs cho 10 slide. Thận trọng: DAB là một chất gây ung thư nguy hiểm.
• 32294_32357₂o.
4. Tháo nắp đậy bằng cách nghiêng hoặc nhúng các slide vào cốc chứa 1 x pbs.
5. Rửa các slide trong 1 x pbs ở nhiệt độ phòng trong 5 phút.
6. Trong thời gian rửa PBS 1 x cuối cùng, thêm 4 PhaL H₂O₂(Hydrogen peroxide) đến dung dịch DAB 10 ml 0,05% và trộn đều.
7. 32737_32834₂o₂cho mỗi slide.Không che bằng phiếu bìa.ủ các slide trong bóng tối ở nhiệt độ phòng trong 10 phút.
8. Xóa 0,05% DAP/H₂O₂Giải pháp bằng cách nghiêng các slide tỷ số bóng đá hôm nay khăn giấy và rửa ngắn các slide trong 1 x pbs. Làm bẩn các slide trong dung dịch Giemsa 2% trong 2 phút.
9. Rửa sạch các slide bằng nước máy và khô bằng một cái phồng tay (các slide có thể được rửa lại nếu nhuộm Giemsa quá tối). Tín hiệu tỷ số bóng đá hôm nay có vẻ sáng màu nâu sẫm, trong khi nhiễm sắc thể màu xanh lam.