Phát hiện tín hiệu tỷ số bóng đá hôm nay tại chỗ (ish) với streptavidin

Hóa chất được đề xuất: Bộ dụng cụ DetekTHER HRP, ENZO Chẩn đoán mèo. Số 43820.

    1. Remove cover slips by dipping the slides in a 2 X SSC solution and letting the cover slips fall from the slides.
    2. Chuẩn bị hỗn hợp tỷ số bóng đá hôm nay sau. 10 PhaL của hỗn hợp tỷ số bóng đá hôm nay được sử dụng cho một slide và được phủ bằng một phiếu vỏ '18 x 18 '. Cần chú ý rằng Sloution được trộn đều, bởi vì dung dịch Dextran Sulfate 50% rất dính.
2 x SSC ở nhiệt độ phòng trong 5 phút,
2 x SSC ở 37 ° C trong 10 phút,
2 x SSC ở nhiệt độ phòng trong 5 phút và
1 x PBS ở nhiệt độ phòng cho 5 mi
  1. Chuẩn bị linh hồn tỷ số bóng đá hôm nay (Streptavidin liên hợp peroxidase)2O with 100 µL 10 X buffer and then add 3-10 µL of the tỷ số bóng đá hôm nay solution (for 10 slides).
  2. Sau khi rửa PBS 1 x, để ráo nước (nhưng không bao giờ khô) các slide trên khăn giấy.
  3. Áp dụng 100 dung dịch phát hiện trên mỗi slide và nắp bằng trượt '22 x 22 'mm; Sau đó đặt các slide trong cùng một buồng ẩm được sử dụng cho bước tỷ số bóng đá hôm nay và ủ ở 37 ° C trong 30 phút. Trong bước này, hãy chuẩn bị giải pháp 0,05 % DAB và 2 % GIEMSA:
    • 0,05% DAB (Diaminobenzidine Tetrahydrochloride) là 5 mg DAB trong 10 ml 1 x pbs cho 10 slide. Thận trọng: DAB là một chất gây ung thư nguy hiểm.
    • 2 % Giemsa solution is 4-mL stock Giemsa solution in 200-mL H2o.
  4. Tháo nắp đậy bằng cách nghiêng hoặc nhúng các slide vào cốc chứa 1 x pbs.
  5. Rửa các slide trong 1 x pbs ở nhiệt độ phòng trong 5 phút.
  6. Trong thời gian rửa PBS 1 x cuối cùng, thêm 4 PhaL H2o2(Hydrogen peroxide) đến dung dịch DAB 10 ml 0,05% và trộn đều.
  7. After the last 1 X PBS wash, drain the slides on paper towels and apply 1 mL of the 0.05% DAP/H2o2cho mỗi slide.Không che bằng phiếu bìa.ủ các slide trong bóng tối ở nhiệt độ phòng trong 10 phút.
  8. Xóa 0,05% DAP/H2O2Giải pháp bằng cách nghiêng các slide tỷ số bóng đá hôm nay khăn giấy và rửa ngắn các slide trong 1 x pbs. Làm bẩn các slide trong dung dịch Giemsa 2% trong 2 phút.
  9. Rửa sạch các slide bằng nước máy và khô bằng một cái phồng tay (các slide có thể được rửa lại nếu nhuộm Giemsa quá tối). Tín hiệu tỷ số bóng đá hôm nay có vẻ sáng màu nâu sẫm, trong khi nhiễm sắc thể màu xanh lam.