xem bóng đá số dò

tiền sử dụng

1. Đặt lò lai thành 65 ° C.
2. Thaw³²P đồng vị trong mui xe.
3. Vị trí màng trong ống lai.
4. Thêm 50 ml bộ đệm tiền sử dụng trước xem bóng đá sốo mỗi ống.

bộ đệm tiền sử dụng trước[cho 4 đầu dò]

DDH20	125 ml
20x SSPE	60 ml
Giải pháp của DeNhardt 100x	10 ml
20% SDS	5 ml
DNA tinh trùng cá hồi[10 mg/ml; Đun sôi trong 5 phút và đặt trên băng 5 phút trước khi thêm]	1 ml
Total	200 ml

1. màng tế bào tiền chế trong ít nhất 6 giờ đến qua đêm.

Ghi nhãn thăm dò

1. Nước nóng để đun sôi trong cốc trên đĩa nóng.
2. Thành phần ghi nhãn là

Thành phần ghi nhãn

DNA	1.0 PhaL [20 Ném50 ng]
DDH20	4.0 PhaL [Tổng thể tích của H20 và đầu dò = 5 PhaL]
oligo Primers	1.0 PhaL
DNTPS [5 mm]	1.5
Klenow polymerase	1.0 PhaL
Bộ đệm 10x Klenow	1.5 TiếtL
DCTP32P	5.0 PhaL
Total	15.0

1. Conbine DDH₂0, oligo primer và DNA trong ống vi ống 1,5 ml, đun sôi trong 4 phút và đặt trên băng.
2. Thêm dntps, bộ đệm 10x, enzyme klenow và³²p. Trộn, quay ngắn gọn và cho phép phản ứng qua đêm ở nhiệt độ phòng hoặc đặt ở 37 ° C trong 2 giờ.

Chuẩn bị cột

1. Thêm len thủy tinh xem bóng đá sốo đế của ống tiêm 1 ml và đặt xem bóng đá sốo ống ly tâm 15 ml.
2. Sử dụng pipet chuyển, hãy lấp đầy ống tiêm bằng dung dịchSephadex G-50Trong TE. Tránh nhận được bong bóng khí trong cột.
3. 35149_35209Sephadex G-50Giải pháp và máy ly tâm ở 1.500 vòng / phút trong 4 phút.
4. Thêm 200 TEL xem bóng đá sốo mỗi cột và ly tâm trong 4 phút tại 1.500 vòng / phút.

Tinh chế thăm dò

1. Thêm 185 Laul của TE xem bóng đá sốo mỗi đầu dò.
2. Cắt nắp ra khỏi ống và rút tất cả dung dịch đầu dò từ ống bằng ống. Đặt một ống rỗng dưới ống tiêm và thêm đầu dò xem bóng đá sốo đầu cột.
3. Quay cột trong 4 phút tại 1.500 vòng / phút.
4. loại bỏ cột; Xóa ống với đầu dò được khen ngợi và tóm tắt.
5. Thêm một khóa nắp xem bóng đá sốo ống, đun sôi trong 4 phút và đặt trên băng.